火雞星狀病毒PCR檢測試劑盒說明書

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
D-(−)-Arabise促腎上腺皮質激素片段 1-10 人   97%滅幼脲 分析標準品，97%

L（+）Arabise促腎上腺皮質激素片段 1-17 人   ≥97% (HPLC)滅幼脲標準溶液 100μg/ml,u=4%，酮

D（+）-Arabitol促腎上腺皮質激素片段 1-24 人   ≥97% (HPLC)滅幼脲標準溶液 10μg/ml,u=6%，酮

Gum acacia powderAdrerphin ≥95% (HPLC) 分析標準品，99%（）

Canada balsam腎上腺髓質素(22-52 )(人體)   ≥97% (HPLC)標準溶液 100μg/ml,u=3%（）

Ethyl carbamateβ-淀粉樣多肽 1-42  ≥95% (HPLC)標準溶液 10μg/ml,u=6%（）

D-XyloseAngiotensin III,human ≥98.0% (HPCE)芐草隆 分析標準品,99.5%

D-Xylulose[Ile7] Angiotensin III ≥95% (HPLC)丁硫溶液100μg/ml,溶劑:酮

Xylitol替普羅肽 ≥95% (TLC)丁硫溶液10μg/ml,溶劑:酮

CholesterolAutocamtide 2 trifluoroacetate salt ≥97% (HPLC)環庚草 分析標準品，92%

Cholesteryl acetate[Arg8]-Vasotocin acetate salt ≥97% (HPLC)甲基毒死蜱標準溶液 10μg/ml,u=6～4%，酮

Cholesteryl chlorideBOC-O-芐基-L-酪氨酸 98%甲基毒死蜱標準溶液 100μg/ml,u=6～4%，酮

β-SitosterolBoc-L-谷氨酰胺 98%克菌丹標準溶液 100μg/ml,u=3%

GlycogenN-叔丁氧羰基-D-3-氯苯氨酸 98%克菌丹標準溶液 10μg/ml,u=4%

Glycogen from oysterBoc-N-甲基-L-纈氨酸 98%綠麥隆標準溶液 100μg/ml,u=4%

Glycogen from rabbit liverBOC-D-氨酸 98%綠麥隆標準溶液 10μg/ml,u=6%

十六(分析標準品,≥99.5%(GC))GPX1 Antibodymu Opioid receptor  µ-型阿片受體抗體

正庚酸(Standard for GC)AMACR (2A10) Mouse mAbMTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor  血管緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體

正庚酸(標準品)AP-2α AntibodyMTTP  微粒體甘油三酯轉運蛋白

1,6-己二(standard for GC)β-Amyloid (1-43 Preferred) (E8C2D) Rabbit mAbMtTF1  線粒體轉錄因子1抗體

2-庚酮(分析標準品,≥99.8%(GC))Mic-1 (L300) AntibodyMTSS1  腫瘤轉移抑制蛋白1

十七烷(分析標準品,≥99.5%(GC))Phospho-Etk (Tyr40) AntibodyMtp53(N235K N239Y)  突變型P53抗體

三十一烷(Standard for GC≥97.0%(GC))CD45 (HI30) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)MTP18  線粒體蛋白18抗體

二十六烷(分析標準品, ≥99.5% (GC))AP-2α (C83E10) Rabbit mAbmTOR/FRAP  雷帕霉素靶蛋白抗體

2-己酮(standard for GC,>99.5%(GC))Dvl2 AntibodyMTNR1B  褪黑素受體1B抗體

正庚(standard for GC,≥98%(GC))Phospho-NDRG1 (Thr346) AntibodyMTNR1A/MTR-1A/MEL-1A-R  褪黑素受體1A/松果體素受體1A抗體
火雞星狀病毒PCR檢測試劑盒說明書G蛋白γ2抗體/鳥嘌呤核苷酸結合蛋白γ2抗體Jacarane中文名：別名：分子式：C9H10O4

G蛋白αS抗體（鳥嘌呤核苷酸結合蛋白Gα s）3-Hydroxychimaphilin中文名：3-羥基梅笠草素別名：分子式：C12H10O3

G蛋白β4抗體/鳥嘌呤核苷酸結合蛋白β亞基4Chimaphilin中文名：梅笠草素別名：2,7-Dimethyl-1,4-naphthoquine分子式：C12H10O2

G蛋白β2抗體/鳥嘌呤核苷酸結合蛋白β亞基2Prerubialatin中文名：別名：分子式：C27H20O7

G蛋白偶聯受體GPR92蛋白抗體(S)-4-Methoxydalbergione中文名：(S)-4-甲氧基黃檀醌別名：(-)-4-Methoxydalbergione分子式：C16H14O3