化膿隱秘菌原名PCR檢測試劑盒規格

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Maleic hydrazide potassium salt咪唑-4-甲酸甲酯 98%5-溴-4氯-3吲哚基β-D 半乳糖 99%

Diphenylcartazide辛二酸單甲酯 98%L-(−)-木糖 99%

Betaine HC1牛血清白蛋白，組分 V 分子生物學級烯酸 AR,>99%(GC)，包含180-200 ppm MEHQ 穩定劑

Betaine牛血清白蛋白 96%甲基烯酸烯酯, 包含50-185 ppm MEHQ穩定劑, 98%

Colchicine5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯對甲苯胺鹽 ≥99% (HPLC)甲基烯酸芐基酯 98%

Demecolcine2,2'-聯喹啉-4,4'-二甲酸二鈉 98%二甲基烯酸1,3-丁二酯, 含200 ppm MEHQ穩定劑, 95%

Indomethacin5-溴-2'-脫氧尿苷 99%二甲基烯酸1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 穩定劑, 95%

Adesine3,5-二羥基苯甲酸 97%二烯酸1,3-丁二酯, 含500 ppm 對苯二酚（HQ）穩定劑, 98%

CAMP二硫蘇糖 99%甲基烯酸叔丁酯, 包含有200 ppm MEHQ阻聚劑, 99%

CAMP，Na5,5'二硫代雙(2-甲酸) 98%甲基烯酸丁酯 GR,99%

5´-AMP3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉 99%烯酸叔丁酯 99%,含10-20 ppm MEHQ 作為穩定劑

5'-AMP，2Na 3,3'-二氨基聯苯胺四鹽酸鹽合物 98%甲基烯酸環己酯, 包含60 - 100 ppm MEHQ（氫醌單甲）穩定劑,

5'-ADP，Na2異硫酸熒光素 96%二甲基烯酸二乙二酯 96%

5'-ATP，Na2谷胱甘肽(還原型)  98%甲基烯酸二乙基氨基乙酯, 包含100 ppm 吩噻, 99%

CytosineL-谷胱甘肽（氧化型）98%烯酸乙氧基乙氧基乙酯, >90%(GC),含1000ppmMEHQ穩定劑

Cytidine鹽酸胍 分子生物學級，99.5%二烯酸二乙二酯 75%

3-氯酚(標準品)Phospho-Rpb1 CTD (Ser2) (E1Z3G) Rabbit mAb (Biotinylated)NDUFS1/NADH dehydrogenase (ubiquine) FeS protein 1 (75kD)  線粒體復合物NDUFS1蛋白抗體

氯苯標準溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)Phospho-Met (Tyr1234/1235) AntibodyNDUFAF4  激素調節增值細胞相關蛋白抗體

3-氯-4-胺(標準品)Phospho-Met (Tyr1234/1235) AntibodyNDUFA9  NDUFA9蛋白抗體

3-氯-4-氟苯胺(標準品)ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)NDUFA8  NADH脫氫酶α家族8抗體

屈(標準品)Met (25H2) Mouse mAbNDUFA10  NADH氧化還原酶輔酶10抗體

屈標準溶液(3.58 μg/mL,基體：甲)Met (25H2) Mouse mAbNDUFA1  NADH氧化還原酶輔酶1抗體

鄰氯甲苯(標準品)ARP2 AntibodyNDST1  NDST1蛋白抗體

鄰甲酚(用于環境分析)ARP2 AntibodyNDRG4  抑癌基因NDRG4抗體

對甲酚(標準品)Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAbNDRG3  抑癌基因NDRG3抗體

氫化鈣(AR,95%)Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAbNDRG2  抑癌基因NDRG2抗體
化膿隱秘菌原名PCR檢測試劑盒規格人肌球蛋白輕鏈(MLC)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myosin light Chain，MLC ELISA Kit*

人肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)ELISA試劑盒英文名稱：Human myosin light chain kinase,MLCK ELISA Kit進口/分裝

人肌球蛋白重鏈(MHC)ELISA試劑盒 英文名稱：Human myosin heavy chain,MHC ELISA Kit進口/分裝

人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Creatine Kinase，CK ELISA Kit*

人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Creatine Kinase MB isoenzyme，CK-MB ELISA Kit進口/分裝

人肌細胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒英文名稱：Human myogenin,MYOG ELISA Kit*小鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。