定量pcr試劑盒反應(yīng)中規(guī)避氣泡的實(shí)用策略

　　在定量PCR試劑盒的反應(yīng)過程中，氣泡的出現(xiàn)看似是一個(gè)小問題，卻可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性產(chǎn)生不可忽視的影響，所以掌握避免氣泡產(chǎn)生的有效方法至關(guān)重要。

　　首先從試劑的配制環(huán)節(jié)入手。在進(jìn)行PCR反應(yīng)液的配制時(shí)，要確保移液操作的規(guī)范性和精準(zhǔn)性。使用合適的移液器，并且提前校準(zhǔn)，以保證吸取和加入各成分的量準(zhǔn)確無誤，避免因液體量差異導(dǎo)致產(chǎn)生不必要的空間，進(jìn)而形成氣泡。比如在添加模板DNA、引物、酶等關(guān)鍵試劑時(shí)，應(yīng)緩慢且穩(wěn)定地操作移液器，讓液體沿著管壁緩緩流入反應(yīng)管中，減少液體沖擊產(chǎn)生氣泡的可能性。

　　加樣順序也頗有講究。一般可以先加入密度較大、不易產(chǎn)生泡沫的緩沖液等成分，再依次加入其他試劑。像先加入PCR緩沖液，然后添加dNTPs、引物等，最后再加入酶，這樣能在一定程度上降低氣泡生成的幾率，因?yàn)榍懊婕尤氲囊后w可以起到一定的緩沖和鋪墊作用，減少后續(xù)加樣時(shí)氣體混入的情況。

　　反應(yīng)管的選擇同樣關(guān)鍵。要選用質(zhì)量良好、管壁光滑且密封性佳的PCR反應(yīng)管。一些劣質(zhì)的反應(yīng)管可能管壁存在瑕疵，容易在液體加入后吸附氣體形成氣泡，或在后續(xù)的擴(kuò)增過程中因氣壓變化導(dǎo)致氣泡產(chǎn)生。而優(yōu)質(zhì)、合適的反應(yīng)管能夠保證液體在其內(nèi)部均勻分布，減少氣泡的附著點(diǎn)。

　　在混勻反應(yīng)液時(shí)，應(yīng)采用正確的方式。盡量避免劇烈地渦旋振蕩，因?yàn)檫@很容易卷入空氣形成氣泡。可以采用輕柔的顛倒混勻幾次的方法，或者使用低速離心的方式來使液體聚集在管底，讓可能存在的微小氣泡被排擠到管口處，進(jìn)而排出反應(yīng)管，確保反應(yīng)液中沒有氣泡殘留。

　　另外，整個(gè)操作過程最好在超凈工作臺(tái)中完成，并且保持環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定，避免外界氣流的急劇變化和干擾，防止因空氣流動(dòng)不穩(wěn)定而帶入氣泡到反應(yīng)體系中。

　　通過以上這些細(xì)致且實(shí)用的操作要點(diǎn)，在定量PCR試劑盒反應(yīng)過程中用心把控每一個(gè)環(huán)節(jié)，就能很大程度地避免氣泡的出現(xiàn)，從而保障定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和有效性，為科研、檢測(cè)等工作提供準(zhǔn)確可靠的幫助。